“五一国际劳动节”

是世界上80多个国家的全国性节日

它是全世界劳动人民共同拥有的节日

所以，今天要讲劳动？

还是PCR扩增？

NO! ! 以劳动的名义

我！们！要！PCR-Free！

全基因组测序被广泛应用于人类疾病研究、动植物基因组研究、微生物基因组研究等。传统全基因测序在样本制备中通常都会用PCR方法进行文库构建，这种方法虽然能够适用于较低起始量的样本建库，但在PCR过程中，会导致基因组部分复杂区域丢失或者引入扩增错误。为了让基因组数据保真度更高，华大智造研发团队经过两年研发，推出重量级新品MGIEasy PCR-Free DNA文库制备试剂套装。

这款试剂套装全流程无PCR扩增步骤，使用1μg 基因组DNA仅需3.5个小时就能获得高准确度的全基因组文库。相比于传统WGS测序，利用MGIEasy PCR-Free DNA文库制备试剂套装获得的变异检测性能，尤其是InDel检测灵敏度和准确性等方面已达到业界领先水平，无PCR扩增错误累积，基因组覆盖均一性好，变异检测性能优，实现了建库+测序全流程的“真”“正”“准”和“快”，能够最大程度还原基因组真实原貌。这款试剂盒适用于华大智造多款测序平台，如MGISEQ-2000、BGISEQ-500等。

真

建库+测序全流程，无指数扩增，无扩增bias，无扩增错误累积

正

更均一的基因组覆盖度，覆盖GC富集区域、启动子、重复区域

准

更优秀的变异检测性能，InDel检测的灵敏度和准确性达业内领先水平

快

无需PCR过程，仅需3.5小时完成文库构建

数据展示

真：无扩增错误累积

由于建库过程中去除了PCR扩增步骤，利用MGIEasy PCR-Free DNA文库制备试剂套装获得的文库（简称MGI WGS PCR-Free文库）无PCR引入的错误或者bias。结合MGI DNBSEQ^TM测序技术利用滚环复制进行DNA纳米球（测序模板）的制备（原理如图1所示），可以避免基于PCR指数扩增引入的测序错误累积，最大限度的保证基因组的真实性。

图1：MGIEasy PCR-Free DNA文库制备过程

正：更高的基因组覆盖均一性

1-利用MGIEasy PCR-Free DNA文库进行不同GC含量的对比实验

选择3种不同GC含量的细菌，分别是OlsenellaProfusa，62%；E.coli, 50%;Bacillus megaterium, 38%， 均采用1 μg gDNA为起始量，物理打断，MGIEasy PCR-Free DNA文库制备试剂套装建库，基于MGIESEQ-2000 进行PE150测序和分析。结果如图2所示，高GC菌（62%）和低GC菌（38%）的基因组覆盖均一性和中GC菌（50%）类似，接近理想的基因组覆盖度，说明MGI WGS PCR-Free在不同GC含量的样本中可以实现均一的覆盖。

图2：不同GC含量的细菌的GC bias示意图

图释：将Reference 和实测数据均以100bp划分窗口，统计每个窗口的GC 含量后按照0-100%分类排序，统计每个GC含量百分比内的窗口数量，再将每个GC含量百分比内的实测窗口数除以Reference窗口数，得到均一化的覆盖度，用蓝色点表示。灰色水平线表示理想的归一化覆盖度，表示为1.0， 蓝色点线表示样本的实际归一化的覆盖度。蓝色点线约接近1.0， 说明样本的基因组覆盖均一性越好。

2-利用MGIEasy PCR-Free DNA文库与MGIEasy DNA文库的对比实验

以1μg 人标准品NA12878起始，物理打断，采用MGIEasy PCR-Free DNA文库制备试剂套装和传统WGS试剂盒分别建库，然后基于MGISEQ-2000平台进行 PE150测序， 截取30X数据进行分析。结果显示，同传统的WGS PCR相比较，WGS PCR-Free的测序深度频率分布（图3-左图，红色柱状图）更趋接近于泊松分布的理想的测序深度频率（图3-左图，蓝色线状图），说明WGS PCR-Free的测序数据具有更好的基因组覆盖均一性。

图3：WGS PCR-Free和WGS PCR测序深度频率分布图

图释：X轴，表示测序深度；Y轴，表示测序深度频率分布，代表某一深度占所有深度的百分比。红色柱状图表示实际情况下的占比；蓝色线状图表示理想情况下的占比。

准：超级优秀的InDel变异检测性能

选择人标准品样本NA12878，采用MGIEasy PCR-Free DNA文库制备试剂套装建库，基于MGISEQ-2000平台进行PE150测序，获得WGS PCR-Free测序数据，截取30X数据分析；同时，对比业内其他品牌试剂盒（使用其官方公布的在普通测序平台进行的WGS PCR和WGS PCR-Free数据），同样截取30X数据进行分析。分析结果如图4所示，MGI WGS PCR-Free具有优秀的变异检测性能，尤其是InDel检测准确性和灵敏度分别高达99.49% and 99.18%, 明显优于业内其他品牌试剂盒在普通测序平台的WGS PCR和PCR-Free的检测性能。此外，MGI WGS PCR-Free的SNP检测准确性和灵敏度与业内其他品牌试剂盒基本持平，均高于99.9%。

图4：比较不同测序平台的WGS PCR-Free和WGS PCR的变异检测性能

快：无需PCR，文库构建仅需3.5小时

MGIEasy PCR-Free DNA文库采用一管法完成末端修复和接头连接反应，无需进行多步纯化反应；同时由于去除了PCR扩增和纯化步骤，相比较常规PCR文库，操作更简便，且有效避免了扩增产物污染问题。从打断片选DNA开始，全流程最短仅需3.5小时。

图5：PCR-Free VS PCR建库流程

一颗彩蛋

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邀您新品尝鲜

参与征集劳动节“花式应用”

TOP5应用案例赢取免单机会

活动时间：2019.05.01-2019.06.30

活动地区：仅限中国大陆地区

活动规则：凡在活动期间抢鲜购买MGIEasy PCR-Free DNA文库制备试剂套装，均有机会参与评选；参评案例将在活动结束后公开展示，公式周期至少一个月；获票数目最高的前5名应用单位/应用案例将有机会赢取全额免单机会，即在活动期间为尝试“花式应用”所购买的MGIEasy PCR-Free DNA文库制备试剂套装费用全额返还。

注：本次活动解释权归华大智造市场部所有。

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